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特定蛋白分析仪的分析方法
2019-03-22 13:32:11
特定蛋白分析仪分析方法主要有这么几种，微量凯氏定氮法 、双缩脲法、Folin—酚试剂法 、改良的简易Folin—酚试剂法、考马斯亮兰法，那么这几种方法各有什么特点呢？
1.微量凯氏定氮法，样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。敏度低，误差大，耗时长。
2.双缩脲法
双缩脲是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 测定快速，但是灵敏度差，不精确。
3.Folin—酚试剂法
这种蛋白质测定法是灵敏的方法之一。过去此法是应用广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。测试灵敏度高，是较为常用的方法
4.改良的简易Folin—酚试剂法
改良的快速简易法，可获得与 Folin—酚试剂法相接近的结果原理与方法三Folin—酚试剂法基本相同，，采用化学反应显色后，在660nm处用分光光度法分析。但更为快速简易。
5.考马斯亮兰法
1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法，是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度高的蛋白质测定法。 目前灵敏度高的蛋白质测定法。干扰物质少。用于不同蛋白质测定时有较大的偏差。
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